四、逆双杂交系统和三杂交技术

酵母双杂交技术在应用中发挥了巨大的作用，但人们也注意到了它有一定的局限性。为此发展了多种适应不同需求的改型双杂交技术。逆向双杂交技术（reverse two-hybrid system）用于检测能阻断2个蛋白间相互作用的蛋白结构，其设计大致可以分为两类。一类是用URA3或CYHZ基因作为报告基因。待测蛋白之间发生相互作用后首先表达抑制因子TetR，TetR结合到操纵基因后就抑制了报告基因HIS3的表达，结果转化子不能生长。利用这种方法鉴定出了cAMP应答元件结合蛋白中第33位丝氨酸的突变会阻断其与辅助激活 ......