DNA连接酶(DNA ligase)的作用是催化相邻的3 ′‐OH和5 ′‐磷酸基团形成3 ′,5 ′‐磷酸二酯键,从而使DNA片段或单链断裂形成的缺口连接起来。在基因克隆技术中所使用的DNA连接酶有两种来源:一种是由T4噬菌体DNA编码、通过感染大肠杆菌而生产的T4 DNA连接酶。另一种是由大肠杆菌染色体DNA编码的DNA连接酶。T4 DNA连接酶需ATP作为辅因子,其对平端和黏端都能连接。两者相比,T4 DNA连接酶更常用、用途更广泛。在制备载体时,用碱性磷酸酶处理,可去除载体分子5 ′‐磷酸基团,从 ......