原代培养的首次传代是很重要的,是建立细胞系关键的时期。一般要特别注意以下几点:细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前,不要急于传代。原代培养时细胞多为混杂生长,上皮样细胞和成纤维样细胞并存的情况很多见。首次传代时,细胞接种数量要多一些,使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增殖。当原代培养中的骨肿瘤细胞大量增殖,以覆盖培养瓶的80%以上时就应传代,具体方法如下: 1 )吸除或倒掉瓶内旧培养液,用Hanks液洗涤培养物以尽量去除培养液中的血清成分和死亡的细胞。取出后,用肉眼或显微镜观察细胞是否出现胞质 ......