（五）用“Sybr‐G reen Real Time”（Sybr‐Green实时荧光定量PCR）RT‐PCR进行半定量PCR

市面上有很多仪器可以进行实时定量PCR。与传统的定量PCR通过电泳检测终产物相反，这些机器通过检测反应中发射的荧光从而对每个循环进行监测。实时RT‐PCR不检测扩增产物的大小，因此，也不能对扩增产物和引物二聚体进行区分。有两种方法可用于定量扩增产物：荧光探针和DNA结合（SYBR Green），TaqMan探针可用标记的寡核苷酸探针和一个5 ’核酸酶PCR assay在PCR的过程中产生荧光信号。一般尽量将扩增产物设在模板的3 ’末端，这样可以确保逆转录进行到一定的长度，这个长度足够进行PCR。为验证PC ......