解决对策:在做完反转录以后,PCR扩增时应设立一个丰度较高的常见基因,如β-actin,作为阳性对照。反转录前,在变性胶上分析RNA的完整性。解决对策:在提取RNA的过程中如带有反转录反应的抑制剂,可通过70%乙醇对RNA沉淀进行清洗,除去抑制剂。反转录抑制剂包括:SDS、EDTA、甘油、焦磷酸钠、亚精胺、甲酰胺和胍盐等。解决对策:反转录反应可用随机引物代替Oligo dT,适当提高反转录反应的温度。解决对策:对于每一个模板和引物组合优化镁离子浓度。在开始几个循环使用较高的退火温度,然后使用较低的退火温度 ......
——《基因组学与蛋白质组学实验技术及常见问题对策》
书名:《基因组学与蛋白质组学实验技术及常见问题对策》
栏目:基因组学与蛋白质组学实验技术及常见问题对策 > 第一篇 基因组学研究常用实验方法The Experimental Method Commonly Used i Genomic Researc > 第二章 PCR、RT-PCR、PCR-SSCP、实时荧光定量PCR和DDRT-PCR实验技术及常见问题对策(PCR, RT-PCR, PCR-SSCP, Real-time fluorescent quantitation PCR, DDRT-PCR experiments technology and strategies frequently a
作者:郭葆玉
参编:
页码:59-60
版本:1
出版社:人民卫生出版社
出版时间:2010-12-01