四、基 本 方 法

各种遗传标记的反向斑点杂交技术原则是一致的，下面以PM系统反向斑点杂交技术分型为例说明。合成等位基因特异的寡核苷酸序列，在序列的3 ′端连接polyd T，以斑点形式印迹并固定在尼龙膜上，制成含探针的尼龙膜。各基因引物带有生物素标记，经过PCR扩增后，使目的片段带有生物素标记。杂交后，生物素与耦联有碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶的链亲和素结合，通过酶联反应显色得到蓝色的杂交点。从试剂盒内取出含探针的尼龙膜，置于DNA分型盘凹槽内。对照参考点在探针条上被设计成最淡的分型点，为其他探针的最低参照，如果DNA探针条 ......