（二）定量PCR内参照模板的构建

构建PCR竞争模板有很多途径，但当模板数量相对较高时，例如细胞因子模板，最便捷的构建途径之一。通过PCR技术构建含有多个内参照的复合模板，在构建该复合模板中，每一个内参照的引物5 ′端含有非特异的序列，以便和下一个内参照引物的3 ′端连接。调整cDNA的量使各样品获得相同的次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶（或β‐肌动蛋白）基因扩增，并通过对每一步反应竞争物连续稀释，在细胞因子特异性引物存在的条件下，用于量化目的基因。分析时可采用一种专门的软件如Gennscan，可以结合如上所述的荧光峰度。 ......