（二）复合PCR

然而，在常规分析的基础上成功地进行PCR分析有着很大的困难，即使是5‐重PCR产物也需要仔细地设计PCR引物，使热循环最佳化及反应混合物最佳化。此反应利用了由特异靶PCR引物序列所构成的杂化引物，即引物的5 ’端有20个相同的碱基。以这种共有序列作为引物扩增的诱发点，所有的PCR扩增子以几乎相同的速率被进一步扩增至更高水平。为避免引物二聚体的产生，PCR应先冷后热，并使用有较大的最佳镁离子浓度范围的DNA聚合酶，如Taq DNA聚合酶的Stofel片段。即热循环可如此进行：在第一轮循环中采用对靶基因特异性引物最佳的退火温度，随后在第二轮循环中将完成若干次循环，在此过程中对于广泛的体外引物来说应使用较低的退火温度。