[速览]三、亲和液相色谱‐反相液相色谱

亲和液相色谱是利用固定相对某一类蛋白质或者多肽具有特异性亲和力，从而进行分离的。这种方法对研究蛋白质翻译后修饰，特别是蛋白质的磷酸化、糖基化研究具有重要的意义。Ficarro等将固定化金属亲和色谱柱与反相高效液相色谱联用构成一个二维色谱系统，并与电喷雾串联质谱在线联用，对磷酸肽进行亲和提取、分离纯化和位点分析，提出了一个很有希望的微量磷酸肽检测和鉴定的方法。首先将酵母细胞裂解液中磷酸化和非磷酸化的蛋白质混合物酶解后，对羧基进行甲基化修饰，直接用固定化金属亲和色谱富集磷酸肽，再通过纳喷反相高相液相色谱‐串联质谱分析，鉴定出1000多种磷酸化的肽。