[生理学]（三）应用分子生物学技术进行受体分析

近年来，分子生物学的飞速发展，使人们更容易了解受体的结构特性、作用机制及药物与受体的作用机制。经典的方法有互补DNA（cDNA）克隆法、功能表达筛选法、低严谨杂交法以及利用位点定向突变和缺失突变等分子遗传学技术的方法。 以受体经过分离纯化并获得蛋白的部分肽段的序列为基础，合成相应的核酸探针（probe），利用此探针在富有目标受体的组织所建立的cDNA 文库（cD NA library）中钓取相关的cDNA，经过若干次筛选，获得受体蛋白的cDNA 全链。在体外将cDNA 逆转录为相应的mRNA，用微量注射技术注入爪蟾的卵母细胞，使受体蛋白在卵母细胞内表达，并且组装在膜上。据此，将受体蛋白有关的全cDNA 序列进行测定，并推出蛋白的一级结构氨基酸序列。值得注意的是，这一方法必须有部分纯化受体的结构为基础。 该方法是从富含所研究受体的组织所建立的cDNA 文库中，将含有的cDNA 在体外转录成相应的mRNA 系列，然后将与此相关的各个mRNA 注入爪蟾卵母细胞或将cDNA 构建成质粒转染到其他表达细胞如COS 细胞株中，测定其与受体相应的生理功能，从中筛选出阳性的克隆，从而获得相应的cDNA 全序列，并推导出受体蛋白的一级结构及氨基酸序列。 低严谨杂交法多用于受体亚型或与之相关的受体结构研究，已知一种受体亚型的结构后，以此cDNA 结构为基础，利用部分片段，采用PCR（poly mer ase chain reaction）技术及RACE（rapid amplification of cDNA ends）复制含有此片段序列的DNA 分子，其中可能存在与此受体结构相似的亚型受体结构。