[速览]3﹒IPG胶条的平衡

在二向分离前，必须要平衡IEF胶。平衡过程需要两个步骤，第一步的平衡液成分为50mmol／L Tris缓冲液（pH 8 ﹒。8），含有2%W／V SDS、20mmol／L DTT 6mol／L尿素和30%甘油。在电场作用下，各蛋白质依所带负电荷数目迁移，迁移速率与电荷数成正比关系，亦即实现了蛋白质相对分子质量方向上的分离。为了让SDS与蛋白质充分结合，必须加入尿素和还原剂等，以去除蛋白的高级结构以及亚基之间相互作用，尿素和甘油同时也用于减缓电渗效应，否则会使一向到二向的蛋白质转移率降低。平衡后上二向凝胶之前，IPG胶应沿边缘用滤纸吸1min以去除多余平衡液。