[速览]二、酵母双杂交系统的操作程序

除了GAL4分子中的DNA结合域和转录激活域之外，在大肠杆菌中也具有DNA结合性能的LexA和具有酵母转录激活活性的因子B42、B17等。B42与LexA蛋白融合后，能在酵母中激活LexA操纵基因下游的基因转录。现在几种改进的酵母双杂交系统，其基本原理和操作程序大同小异，这里只介绍较常用的一种。在酵母双杂交系统中，关键是引诱蛋白的设计，这往往就是研究的目的。引诱蛋白在酵母中应能稳定存在且能进入细胞核，通过LexA结合于LeuA操纵基因，最重要的是融合了LexA的引诱蛋白不能直接激活位于LexA操纵基因下游的报告基因的转录。在使用酵母双杂交系统时，假阳性结果可通过设计的一系列对照试验得以排除。