在无菌的条件下,取健康产妇分娩(自然或剖宫产)的新生儿脐带约30c m,4℃保存,6h内使用。原代培养的细胞融合后,倾去培养液,PBS洗1次,加入适量0.05%胰蛋白酶‐0.02%EDTA(浸过培养瓶底即可),37℃消化细胞30~60s左右,此时细胞将要脱壁(倒置相差显微镜下观察细胞颜色加深,由原来的融合状态变成轮廓清晰的单个细胞)。人脐静脉内皮细胞传代培养较困难,一般只能传2~3代,以后细胞陆续死亡脱落。Weibel‐Palade小体虽系内皮细胞特异的结构,但由于电镜标本的制作部位不同,非每个细胞都能检出,故不作为内皮细胞的常规鉴定方法。
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