[文献资料]八、高效液相荧光检测法测定神经元突触体胞液NOS活性

L‐精氨酸在NO合酶及NADPH、氧、钙及钙调素等辅助因子作用下生成等摩尔的L‐胍氨酸和NO，可通过测定反应物L‐胍氨酸以反映NO合酶的活性。L‐胍氨酸不能用紫外或荧光法直接检测，须将L‐胍氨酸荧光衍生化，才能用HPLC荧光检测仪检测其含量。取反应液250 μ l通过一个1ml Amprep CBS阳离子交换柱以除去精氨酸，HPLC测定前取150 μ l流出液与等量的OPA反应试剂进行荧光衍生反应。取20 μ l已知不同浓度的L‐胍氨酸荧光衍生物（标准品）或经荧光衍生后的反应液（样品）进样、分离、测定。本方法的优点是检测灵敏度较高，计算结果较为准确，并能避免接触同位素。缺点是操作步骤繁多，工作量较大，出结果较慢。