用电动剃毛刀剃去动物背部的毛,自然恢复1天,分四个区域:空白区、溶剂区、待试PE区、氮酮区。试验完毕后,对实验动物处以安乐死,立即取用药部位的皮肤,将皮肤切成0.5cm × 1cm的长条状,浸于生理盐水中漂洗以去除血污,置于10%甲醛溶液中,室温下固定1h , 2 ~ 8 ℃固定24h 。用于免疫组化检测的细胞用丙酮室温固定15min ,蒸馏水漂洗3次,加入抗人角蛋白抗体(一抗) FK315 , 37 ℃孵育40min , PBS漂洗后加入羊抗人IgG Fab-HRP (二抗) , 37 ℃孵育40min , DAB显色10min ,苏木素复染,水性封片剂封片后光镜下观察KC纯度并拍照。
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