[文献资料]二、蛋白激酶C 活性的测定

二丁酰佛波醇（PdBu）是佛波醇的衍生物，为外源性PKC激活物质，可特异性地结合于PKC的DAG结合位点上，因此，它是检测PKC常用的试剂。PKC纯化过程中，利用［ 3H ］ PdBu结合来检测其活性峰之所在，方法简便准确。为了测定非特异结合，在上述系统中加入10 μ mol／L非标记的PdBu。然后将滤膜加入闪烁液中测定其计数。通过测定组蛋白放射活性的强弱即可测知PKC活性的高低。用75mmol／L磷酸洗3次（350ml，2min），用液闪仪测定放射强度。同时在反应后使用凝胶电泳技术分离蛋白，再用凝胶进行放射自显影，即可明确究竟何种蛋白被磷酸化，有助于实验结果的分析。