四、紫外分光光度法

由于蛋白质中的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸残基中的苯环含有共扼双键，因此蛋白质溶液在275～280nm处有一紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，其蛋白质的A280与其浓度成正比。据此可进行蛋白质定量测定。据统计，同样浓度（1mg／ml）的1800种蛋白质，其光吸收值在0.3～3.0之间变动，所以此法只适用于半定量或几个样品中蛋白质的相对定量。若样品中含有最大吸收值在260nm处的核酸类物质时，会严重干扰在280nm处测定蛋白质浓度，当这类干扰物质的浓度较大，而核酸含量为蛋白质的20%以下时，可测定A280和A260，并根据下列公式计算出蛋白质浓度。蛋白质本身的立体结构的变化，对测定也会产生不良影响。