[文献资料]第2节 受体结合的研究方案

受体结合实验有膜标本和组织切片两种形式，膜标本溶液应当是含有100 μ g～1mg蛋白质／ml的缓冲液，组织切片通常厚6～20 μ m。一般在室温条件下反应20～60min，使受体配体结合处于“稳定状态”。受体结合不稳定的组织标本，可在“冰上”操作，以增进实验的稳定性。因而有人常规地在孵育液中加入GTP或GTP同系物以评估受体‐G蛋白偶联的程度，或者使参差不齐的高和低亲和力受体的混合状态转变为单一的低亲和力受体，从而简化受体的结合动力学。饱和实验是指孵育一定数目的受体，随着放射活性配基浓度的增加直至能够证明结合不再增加为止，是为“总结合”，包括受体结合和非受体结合的配基。