孵育的试管中含有缓冲液、组织悬浮物、药物或溶媒以及放射配体。放射配体的浓度一般选在等于或低于其解离常数(Kd)的水平。组织的浓度应选在能保证低于10%的放射配体可以被结合的线性范围之内。分装的组织在最后加入并充分混匀以便启动结合过程。孵育的时间要足够长,温度从4~37℃的范围内均可。溶解后不稳定的配体或药物应在实验前临时配制。总之,结合实验应该用能产生最大特异结合和适宜的孵育条件。