每一个DNA片段都用一个生物素标记的和一个未被生物素标记的PCR引物分析,根据目标基因的基因组核苷酸序列资料为每一个可变的核苷酸位点设计一个检测引物,最好扩增片段尽可能小且长度相同,这样可以保证每一个片段都能与链霉亲和素包被支持物有效地、同等地结合。推荐标准为:PCR引物长度为20~23个核苷酸,具有相近的熔点和非互补的3 ′端。在装载到DNA测序仪之前,在TE缓冲液中洗涤梳齿,Autoload面板可与ALFDNA测序仪中凝胶的狭缝相匹配。电泳结果贮存在测序仪电脑中,可以直接看电泳图,也可以使用合适的软件进行分析,如ALF测序仪上的Alelinks软件包。
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