第二节 抑制脑啡肽酶实验

荧光肽dansyl‐D‐Ala‐Gly‐Phe（p NO2）‐Gly（DAGNPG）是脑啡肽代谢的中性金属内肽酶选择性底物。硝基苯残基的存在导致分子内淬灭而引起丹酰基荧光消失，脑啡肽酶可在DAGNPG的Gly‐Phe（p NO2）结合点断裂，此时荧光增强。根据荧光强度的改变可测定对脑啡肽酶的抑制作用强弱。根据试验目的，取不同的新鲜大鼠组织，匀浆，低速离心。取上清液高速离心，沉淀重悬后用于测定酶活性［ 1 ］。加入1.35ml Tris‐HCl缓冲液后500 × g离心30分钟，取1ml上清进行荧光检测，激发波长为342nm，发射波长为562nm。大鼠不同组织中脑啡肽酶活性有差别。采用DAGNPG测定脑啡肽酶活性的操作温度为37℃。