三、荧光共振能量转移

荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer，FRET）是一项应用能量转移来测量分子内和分子间的距离的技术，最早由Forster于1948年作为一种物理现象提出。当供体发射的荧光与受体发色团分子的吸收光谱重叠，且两个探针在几个原子直径范围以内时，供体荧光分子的激发能诱发受体分子发出荧光，同时供体荧光分子自身的荧光强度衰减，发生非放射性能量转移，该现象即FRET，其程度与供、受体分子的空间距离紧密相关。供体和受体分子间距必须在10nm以内,故该方法受荧光发色基团距离的空间限制，只能研究分子量小于200kD的蛋白。