70年代中期随着核酸研究的开展,核酸序列的测定成为一项重要的技术,而高分辨变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术将彼此相差1个碱基的单链DNA分离开来,为准确测定DNA序列奠定了基础。1977年Maxam和Gilbert等创建了化学裂解法、Sanger发明了双脱氧末端终止法测定DNA序列。应用这项技术,新的基因被鉴定,基因突变被识别。但由于PCR产物中含有两个等位基因,当在一片段中检出两个突变时,难以确定这两个突变是位于同一条染色体上,还是分别位于两条染色体上,需要克隆测序或进行家系分离分析。 ......