四、淋巴细胞杂交瘤的培养

小鼠骨髓瘤细胞株常用于淋巴细胞杂交瘤的制备，常用的细胞株有小鼠NS‐1，SP2／0和X63‐Ag9‐653等细胞系。在严格的无菌条件下取生长良好的细胞株，计数活细胞。瘤细胞的存活率需要95%以上。每日在倒置显微镜下观察一次，观察的主要内容：是否有污染，细胞生长状态和pH等情况。一般在5d左右培养细胞可达到最大密度需要再次传代。瘤细胞株在体外培养过程中会发生突变回复，逐渐转变成次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）阳性，为了防止或去除回复突变的细胞，半年后宜用含15 μ g／ml8‐氮杂鸟嘌呤的DMEM培养液再培养筛选一次，清除突变回复的细胞。向两瓶中加入适量培养液，混匀细胞，37℃，5%CO2培养箱继续培养。