常用的标记物有荧光素、酶、铁蛋白、生物素、金和放射性同位素等。目前,光镜免疫组化常用的有免疫荧光组织化学方法和免疫酶组织化学方法(enzyme labelled immunohistochemical method,简称免疫酶组化法或酶联免疫分析法)。先用第一抗体孵育组织切片,在第一抗体与组织中的抗原结合后,再用荧光素标记的第二抗体孵育,第二抗体是抗产生第一抗体的动物(一般为兔或鼠)的IgG的抗体,在荧光显微镜下观察结合的结果,发荧光部位即抗原所在处(图13‐。如免疫金染色法(immunogold staining,IGS)、免疫金银染色法(immunogold‐si1ver staining,IGSS)等敏感性均高于ABC方法。
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