将微量镇痛药外周和脑室(或核团)注射给药,测定、比较两者的ED50或镇痛效应剂量或强度,当脑室(或核团)注射给药与外周注射给药效应剂量或强度比较有显著性差异,可判断该镇痛药有中枢镇痛作用,为中枢性镇痛药。关于镇痛药作用部位的评价,Nakamura等应用大鼠醋酸扭体法测定Tol metin钠ip或iv的镇痛ED50,判定其镇痛作用部位,若镇痛药作用部位在中枢,ED50(ip)≥ ED50(iv),若镇痛药作用部位在外周,ED50(ip)< ED50(iv)[ 5 ]。实验结束后,注入一定量的硫堇(thionin)或溴酚蓝溶液,并注入生理盐水,最后剖检观察是否插入侧脑室以及颜色的分布范围,部位错误者删除。
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