五、氨基比林‐N‐脱甲基酶活性测定

氨基比林主要经CYP3A催化，先进行α‐碳原子的羟化，随之甲醇胺中间产物分解，释放出甲醛。根据Hantzsch反应原理，通过Nash比色法可以测定溶液中甲醛的生成量来反应CYP3A的活性。以甲醛的浓度为横坐标，各浓度标准液的OD值为纵坐标制作标准曲线。2）样品测定：取待测微粒体0.5ml，加入Hepes缓冲液0.4ml，然后加入氨基比林0.1ml，37℃水浴3min，然后测定管依次加入NADPH生成系统0.2ml启动反应，空白管加0.2ml蒸馏水作对照，37℃水浴30min。根据测得的OD值，利用标准曲线求得甲醛的浓度，然后计算每毫克蛋白单位时间内的甲醛生成量，以表示酶活性。