第七节 大鼠肝细胞原代培养实验方法

离体的大鼠原代肝细胞，作为可溶性酶与组织之间、整体动物与离体肝之间的一种中介的实验模型，越来越多地被用于生化毒理学、药理学和环境毒理学等学科领域。大鼠肝细胞分离方法是在肝离体灌流技术中引进胶原酶，依靠胶原酶消化肝细胞间组织而达到分散肝细胞的目的。然后再经分离纯化步骤而得到所需用的肝细胞或非实质细胞，进行原代培养，以观察药物的作用。肝细胞的分散:在肝离体灌注条件下，采用Seglen两步法分散肝细胞：先用无钙灌流液作预灌流，目的在于冲去残血，除去或减少肝细胞间的钙离子，以减少细胞间的黏着力。细胞数过多则细胞相互挤压或重叠，接受氧气和营养物质会不均匀、不充分，则会影响肝细胞功能状态。