第三节 荧光原位杂交的方法学

无论用何种探针，FISH实验过程一般包括：标本的制备和预处理、探针和标本上靶DNA的变性、杂交、杂交后洗涤和杂交信号的检测、显微观察与结果分析。常用的FISH标本有中期染色体标本、细胞培养标本或玻片、单细胞核悬液滴片、组织切片和脱落细胞片（如羊水细胞标本）。标本进行蛋白酶消化主要为了提高靶组织的通透性，使核酸暴露以便提高杂交效率。而且标本中可能存在的内源性生物素等蛋白质也会产生背景，蛋白酶处理也消除这些影响。蛋白酶的浓度和处理时间要适度，因为蛋白酶的浓度太低或处理时间过短，靶组织暴露不充分，探针不易结合。 ......