[辅助检查]五、磷酸化位点的质谱分析

应用32 P放射性标记和抗体技术可以规模化地识别磷酸化蛋白质，但对每一个磷酸化蛋白质个体需要更进一步了解其确切的磷酸化位点，质谱技术为此提供了多种解决方案。Annan等以这种扫描方式为基础建立了一套分析磷酸肽的系统方法，肽混合物先经LC-MS分析，在负离子检测模式下经母离子扫描找出含有磷酸肽的液相馏分，收集该馏分再次用母离子扫描方式确定磷酸肽，最后在正离子模式下对该磷酸肽进行序列分析。为了使丝氨酸和苏氨酸也可以在正离子模式下进行母离子扫描实验，Steen等基于磷酸氨基酸的β-消除反应设计了一种化学修饰方式 ......