[辅助检查]第二节 目的基因与载体的酶切

基因克隆的载体DNA有一段集中存在的单一限制性内切酶位点，可供插入目的基因之用。经过细菌扩增的质粒DNA为一环状的DNA，基因克隆载体构建的第一步必须将质粒环状DNA进行选择性的限制性内切酶切割，以暴露可供目的基因插入的连接位点。2 ．载体和目的基因分别双酶切：如果对载体和目的基因分别采用两种不同的限制酶切割，如用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ分别切割载体和目的基因，则目的基因酶切片段的两端可以分别与载体分子相应的酶切末端互补连接。用70%乙醇漂洗一次，离心，弃上清，室温干燥后加适量TE溶解。 ......