[辅助检查]四、探针杂交技术在腹泻病原检测中的应用

探针制备:采用大质粒编码福氏志贺菌5型ipaH侵袭性基因,通过Cosmid重组质粒，克隆出不具特殊功能的3个E ﹒ coRI片段，其中17kb片段，用α‐32P同位素标记，制备Sh‐DNA探针，用于检测志贺菌ipaH侵袭性基因。预杂交起封闭作用，防止探针DNA与膜产生非特异性结合而大量消耗探针。用二步法缺口翻译反应标记探针，探针DNA浓度为20 μ g／ml，Bio‐11‐dUTP终浓度为80 μ mol／L，反应后用乙醇沉淀收集标记DNA探针。4）DNA纯化与探针标记：PCR扩增产物增大至300 μ l ......