2 ﹒加受检标本使之与固相抗体反应一段时间,让标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物,洗涤除去其他未结合物质。3 ﹒加酶标抗体固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新的水平,应用针对抗原分子中的两个不同决定簇的两种单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体进行的双位点夹心法,可将加入标本和加入酶标抗体两步并作一步。结合物中游离酶经洗涤而被洗去,不影响ELISA中最后的酶活性测定,游离的抗体则会与酶标抗体竞争相应的固相抗原,因而减低了结合到固相上的酶标抗体量 ......