二、酵母双杂交的主要实验步骤

用于未知蛋白质相互作用筛选的酵母双杂交实验步骤较为复杂，其基本步骤可归纳于图13-4。组氨酸缺陷筛选基因为本实验所用GAL4酵母双杂交系统的报告基因，故a、b、d “诱饵”质粒相应的酵母转化子在SD /-his平板上无菌落生长，表明“诱饵”载体无自激活作用。进一步的鉴定需要从阳性克隆酵母菌中提取质粒（实验流程13-1），通过限制性内切核酸酶酶切片段的存在与否确定是否为有意义的克隆，同时也可以用这一方法依据酶切片段的大小对阳性克隆进行初步分类，选择出代表性的克隆进行序列分析。因此，酵母双杂交系统往往只是一个 ......