[辅助检查]二、连接反应时需要考虑的一些因素

DNA的连接反应是一种说起来简单做起来难的操作过程，需要考虑一些容易忽视的影响因素，并应学会从凝胶成像上估计连接时DNA片段和载体的具体用量。连接反应是在反应缓冲液中进行的，因此，反应体系中的离子种类、离子强度、酸碱度以及ATP浓度等都对连接反应有影响。含ATP的连接缓冲液不宜长期保存，即使低温保存也往往失效，建议应用这种缓冲液时可补加ATP，或自行配制不含ATP的缓冲液长期保存，用时加入新鲜配制的ATP。进行黏性末端连接时,高浓度的连接酶一般需要稀释，稀释液的成分与酶缓冲液成分相同或相似即可。对于载体D ......