第三节 RNA 酶保护试验（RNase protection assay，RPAs）

利用该特点，可首先使cRNA探针与特异mRNA结合，再应用RNase水解未结合的单链mRNA和标记的游离RNA探针，从而对特异mRNA进行定量。根据获得的目的mRNA（cDNA）序列和GAPDH序列，分别合成带有SP6启动子序列，作为模板。由于GAP DH在绝大多数组织细胞高度表达，合成探针时可将α‐32P‐UTP减少到10 μ Ci，相应增加UTP至120 μ M，这样可适当减低探针的放射活性。定量：根据32P对探针进行定量。杂交:RNA样品5～10μg与105cpm的探针或内参GAPDH 2 ﹒ 5× ......