第三节 其他蛋白质共价修饰分析

随着对蛋白质共价修饰认识的深入，相应的分析技术也不断涌现。这里介绍几种常用的分析方法。这里主要介绍如何鉴定某种蛋白质是否作为泛素化的底物和确定某种蛋白质是否具有泛素连接酶活性的主要方法。泛素化分析与常规免疫沉淀和免疫印迹实验不同的是：① Lys-48方式连接的多聚泛素链修饰的蛋白质很快被26S蛋白酶体降解，难以检测到目的蛋白的泛素化。在免疫沉淀纯化蛋白质前需要使细胞裂解液充分变性,以排除其他泛素化蛋白质与目的蛋白质间非共价相互作用的干扰，证明目的蛋白质确为泛素化共价修饰。更有意义的是将用于临床疾病的诊断， ......