硕士期间有幸参与导师的国家自然科学基金课题研究,采用免疫印迹技术分析细胞内信号转导分子(包括非磷酸化和磷酸化蛋白) 。首先收集细胞,加药干预,然后裂解细胞,提取胞内蛋白进行免疫印迹实验,以检测内参( β - actin )和3个非磷酸化的信号转导分子( JAK1 、 TYK2和STAT3 )表达。我不得不从头开始逐步思索磷酸化蛋白WB与非磷酸化蛋白WB的区别。针对细胞内源性磷酸酶,在样品制备时,需要在细胞裂解液中加入足量且新鲜的磷酸酶抑制剂,查阅大量文献资料,终于找到一篇也是WB检测磷酸化蛋白时用的细胞裂 ......