实际上,PCR扩增反应并不是无限的。随产物增加,酶与模板的比例下降:当合成的DNA量超过反应体系中DNA聚合酶在限定延伸时间内所能复制的能力时,底物便过量了。非特异性产物或引物二聚体与反应物的竞争。变性后的单链DNA片段在与引物退火前即自身配对结合,这种抑制作用是由于分枝迁移(branch migration)和引物被取代,还是因为DNA聚合酶的无效取代合成所致,目前尚不清楚。当产物浓度达到10p mol/μ l时常出现这种限制效应,而且很难避免,除非稀释反应溶液。 ......