二、PCR反应条件的优化

PCR方法操作简便，但影响因素颇多，因此需根据不同的目的及不同的DNA模板，探索最适条件，以获得最佳反应结果。以下主要从反应的特异性、敏感性、忠实性及扩增效率等方面讨论PCR反应条件的优化。引物与模板的退火温度由引物的长度及GC含量决定。增加退火温度可减少引物与模板的非特异结合，提高PCR反应特异性。降低退火温度则可增加PCR反应的敏感性。目的片段小于150bp时可以省略延伸步骤，因为退火温度下DNA聚合酶的活性已足以完成短序列的合成。最近，还有人采用在反应体系中加入DNA聚合酶的单克隆抗体，当温度升高使 ......