3﹒实验设计

由DNA合成设备中得到的引物（20～30OD）溶解于500微升水中。通过下式计算摩尔浓度（M）：吸收值（260nm）（OD）＝各碱基消除系数之和×光路长度×浓度／稀释倍数。向44μl水中加入6μl引物原液,从中取16.3μ l加入32.6μ l的水中，在取二次稀释后的液体8.3μ l加入42.6μ l水中）领取九支管，分别加入40 μ l靶物／mastermix／探针混合液以及正向和反向引物各10 μ l，混匀，取25 μ l至双层管反应板上。以最优化的引物浓度重复一次该过程，此次改变探针的浓度，分别加入 ......