[文献资料]第三节　经验和体会

1 .目的基因克隆至穿梭载体时，应注意几点第一，分析穿梭载体中MCS的酶切位点是否包含目的基因两端的酶切位点，且方向正确。第二，分析目的基因中是否含有酶切位点Pme Ⅰ 、 EcoR Ⅰ及Pac Ⅰ 。在进行腺病毒重组前，包含目的基因的穿梭载体必须经过限制性内切酶Pme Ⅰ或EcoR Ⅰ进行线性化，因此，如果目的基因中同时包含这两种限制性内切酶，则必须使用分子生物学手段对目的基因进行改造，使其不包含这两种酶切位点。同理，在转染QBI-293A细胞前必须使用限制性内切酶Pac Ⅰ对重组的腺病毒质粒进行线性化 ......