三、利用酵母展示抗体库筛选抗体的操作步骤［118］

设计引物并引入相应的酶切位点, PCR法扩增抗体基因片段。PCR产物和质粒（如pPNL6）双酶切。酵母EBY100单菌落于YPD培养基中, 30℃过夜培养。用50ml缓冲液重悬沉淀细胞，漩涡振荡器保证细胞沉淀充分悬起。第1轮的筛选产物:100ml的选择性缓冲液(青霉素/链霉素抗性)培养过夜,用葡萄糖抑制ScFv抗体的诱导表达。重复以上步骤进行第2轮的筛选。第2轮的筛选产物:500ml缓冲液重悬,进行染色，以便进行流式细胞仪分选。分离细胞涂平板,保证抗体库的多样性。阳性克隆进行测序，鉴定不同的ScFv抗体。 ......