一、基因剔除载体的设计和构建

影响同源重组效率的因素非常多，如染色体上同源基因所在的位置、基因在ES细胞中的转录状态、载体基因片段与染色体同源区之间同源性的高低、同源区的序列特点等。事实上，用同样的原则构建的不同基因的基因剔除载体，其同源重组效率可相差10倍之大。虽然有多种正性和负性筛选标志可用于基因剔除载体的构建并可大幅度富集同源重组克隆，但通过基因组DNA的结构分析来筛选并确定同源重组克隆的基因组结构仍然是不可避免的。然而，现阶段可利用的组织特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠还十分有限。对Cre转基因表达的精确控制还依赖于更多组织 ......