二、抗磷酸化氨基酸抗体用于蛋白磷酸化分析

原代培养肥大细胞用抗原DNP-HAS刺激后细胞裂解物经电泳、转移后用4G10检测。细胞中原来即存在着一些磷酸化的蛋白质，刺激后明显增强。抗磷酸酪氨酸抗体的使用大大方便了细胞内蛋白酪氨酸磷酸化的分析，它的局限是不能用于直接分析特定蛋白的酪氨酸磷酸化。这些序列特异性的抗磷酸化氨基酸抗体的主要优势是它们可以用于细胞内磷酸化蛋白的快速分析，而不再需要使用放射性核素，也避免了使用蛋白酶、磷酸酶等间接分析手段。细胞裂解物经电泳、转移到PVDF膜，分别用抗磷酸化MAPK和抗非磷酸化MAPK抗体进行ECL分析。 ......