（二）利用PCR 进行定点突变

该方法的基本原理是利用人工合成的寡核苷酸（含有一个或几个非互补的碱基，即突变位点）为引物，直接进行基因扩增反应，从而产生突变型基因。该定点突变方法直接、快速、高效。以下简要介绍几种PCR定点突变法。随后以退火后的产物为模板，用与两个原始片段互补的侧翼引物进行PCR扩增，从而获得带有目的突变的DNA。经过以上两轮PCR后便可得到含有定点突变的DNA片段。针对单纯缺失突变，则使上游或下游引物5 ′端的起点向相应引物的3 ′端移动待缺失长度。将自身环化后的产物转化大肠杆菌,挑取转化细菌单克隆扩增培养，分别提取各 ......