（四）引物的设计

1 .引物长度，一般18～24碱基较为合适。太长时，引物本身或上下游引物之间容易形成复杂结构。2 .上下游引物之间Tm值相差尽可能小，最好在2℃以内。引物3 ’端要完全匹配，而且最后一个碱基最好避开密码子的第3位。6 .引物与模板非特异性匹配要少于连续6个碱基，3 ’端不能大于4个。目前引物设计软件常用的有Primer 5.0、Oligo。下面以Primer 5.0为例介绍基本引物设计时的使用。4 .在引物设计界面上，选择要设计的引物方向（图2-.7 .软件自动出现Search Results框，所有符合 ......