[辅助检查]二、PCR试验的设计

PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。引物的优劣直接关系到PCR特异性和成功与否，引物设计应考虑下述原则。尽管最后一些循环采用的退火温度将导致非特异性的扩增，但此时已经过几轮特异性的扩增，预期的正确产物将超过这些非特异性产物。特异性的增高则因为有二轮反应中所用的特异性引物，即使在首轮反应中出现非特异性扩增，非特异性扩增产物也不会在二轮反应中成为模板，因为非特异性扩增产物不可能具有与二轮反应中特异性引物互补的DNA区域。一旦DNA模板形成，即可同标准PCR一样使DN ......