三、免疫共沉淀常见问题及解决办法

不同的细胞裂解缓冲液（见第九章、附录Ⅳ）可能会有不同的免疫沉淀效果。磷酸盐在pH 7.2缓冲能力强，同时也是磷酸酶抑制剂。而Tris在pH 7.2不是一个很好的缓冲液，也不是磷酸酶抑制剂，不过在加入钙或锰（蛋白结合或激酶活性维持所需）时需使用Tris缓冲液，否则还是首选磷酸盐。蛋白激酶Syk和Src等的酶活性不稳定，大部分会在RIPA中丢失，应该用NP-40裂解液，包含EDTA和磷酸酶抑制剂，且在裂解细胞、沉淀及洗涤全程使用。一般需要进行预实验来确定裂解条件，主要是盐浓度和去垢剂的浓度。免疫共沉淀实验需要 ......