[辅助检查]第四节 DNA片段与载体的重组

目的DNA片段需要借助载体才能在合适的细胞中扩增或表达，因此，将DNA片段插入载体是DNA重组的过程。本节主要介绍两种DNA片段与载体的连接方式以及在实际操作中可能遇到的问题，同时对非连接法的DNA片段与载体重组加以简介。有两种方法可以自己制备3 ′-端带有1个不配对T的线性化质粒载体：①将质粒载体用产生单个T凸出末端的内切酶进行线性化处理。能够产生单个T的内切酶有Mbo Ⅱ、Xcm Ⅰ和Hph Ⅰ，这3种酶可以产生只有1个碱基的黏性末端，其中1 / 4概率是T。利用Taq DNA聚合酶的末端转移酶活性, ......